薄層色譜（TLC）是一種非常有用的跟蹤反應(yīng)的手段，還可以用于柱色譜分離中合適溶劑的選擇。薄層色譜常用的固定相有氧化鋁或硅膠，它們是極性很大（標(biāo)準(zhǔn)）或者是非極性的（反相）。流動相則是一種極性待選的溶劑。在5.301中以及大多數(shù)實驗室實驗中，都將使用標(biāo)準(zhǔn)硅膠板。將溶液中的反應(yīng)混合物點在薄板上，然后利用毛細(xì)作用使溶劑（或混合溶劑）沿板向上移動進(jìn)行展開。根據(jù)混合物中組分的極性，不同化合物將會在薄板上移動不同的距離。極性強的化合物會“粘”在極性的硅膠上，在薄板上移動的距離比較短。而非極性的物質(zhì)將會在流動的溶劑相中保留較長的時間從而在板上移動較大的距離?；衔镆苿拥木嚯x大小用Rf值來表達(dá)。這是一個位于0～1之間的數(shù)值，它的定義為：化合物距離基線（**先點樣時已經(jīng)確定）的距離除以溶劑的前鋒距離基線的距離。
薄層色譜（TLC）實驗步驟：
1) 切割薄板。通常，買來的硅膠板都是方形的玻璃板，必需用鉆石頭玻璃刀按照模板的形狀進(jìn)行切割。在切割玻璃之前，用尺子和鉛筆在薄板的硅膠面上輕輕地標(biāo)出基線的位置（注意不要損壞硅膠面）。借助鋒利的玻璃切割刀和一把引導(dǎo)尺，你便可方便地進(jìn)行玻璃切割。當(dāng)整塊玻璃被切割后，你就可以進(jìn)一步將其分成若干獨立的小塊了。（開始的時候，也許你會感到有一些難度，但經(jīng)過一些訓(xùn)練以后，你便會熟練地掌握該項技術(shù)。）
2) 選取合適的溶劑體系。化合物在薄板上移動距離的多少取決于所選取的溶劑不同。在戊烷和己烷等非極性溶劑中，大多數(shù)極性物質(zhì)不會移動，但是非極性化合物會在薄板上移動一定距離。相反，極性溶劑通常會將非極性的化合物推到溶劑的前段而將極性化合物推離基線。一個好的溶劑體系應(yīng)該使混合物中所有的化合物都離開基線，但并不使所有化合物都到達(dá)溶劑前端， Rf值**好在0.15~0.85之間。雖然這個條件不一定都能滿足，但這應(yīng)該作為薄層色譜分析的目標(biāo)（在柱色譜中，合適的溶劑應(yīng)該滿足Rf在0.2~0.3之間）。那么，應(yīng)該選取哪些溶劑呢？一些標(biāo)準(zhǔn)溶劑和他們的相對極性（從LLP中摘錄）列于如下： 強極性溶劑： 甲醇〉乙醇〉異丙醇
中等極性溶劑： 乙氰〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯 非極性溶劑： 環(huán)己烷，石油醚，己烷，戊烷 常用混合溶劑：
二氯甲烷/己烷或戊烷：5~30%，當(dāng)其他混合溶劑失敗時可以考慮使用。 3) 將1~2mL選定的溶劑體系倒入展開池中，在展開池中放置一大塊濾紙。
4) 將化合物在標(biāo)記過的基線處進(jìn)行點樣。我們用的點樣器是買來的，此外，點樣器也可從加熱過的Pasteur吸管上拔下（你可以參照UROP）。在跟蹤反應(yīng)進(jìn)行時，一定要點上起始反應(yīng)物、反應(yīng)混合物以及兩者的混合物。
5) 展開：讓溶劑向上展開約90%的薄板長度。
6) 從展開池中取出薄板并且馬上用鉛筆標(biāo)注出溶劑到達(dá)的前沿位置。根據(jù)這個算Rf數(shù)值。 7) 讓薄板上的溶劑揮發(fā)掉。
8) 用非破壞性技術(shù)觀察薄板。**好的非破壞性方法就是用紫外燈進(jìn)行觀察。將薄板放在紫外燈下，用鉛筆標(biāo)出所有有紫外活性的點。盡管在5.301中不用這種方法，但我們將采用另一常用的無損方法--用碘染色法。（你可以參看UROP）。
9) 用破壞性方式觀測薄板。當(dāng)化合物沒有紫外活性的時候，只能采用這種方法。在5.301中，提供了很多非常有用的染色劑。使用染色劑時，將干燥的薄板用鑷子夾起并放入染色劑中，確保從基線到溶劑前沿都被浸沒。用紙巾擦干薄板的背面。將薄板放在加熱板上觀察斑點的變化。在斑點變得可見而且背景顏色未能遮蓋住斑點之前，將薄板從加熱板上取下。 10) 根據(jù)初始薄層色譜結(jié)果修改溶劑體系的選擇。如果想讓Rf變得更大一些，可使溶劑體系極性更強些；如果想讓Rf變小，就應(yīng)該使溶劑體系的極性減小些。如果在薄板上點樣變成了條紋狀而不是一個圓圈狀，那么你的樣品濃度可能太高了。稀釋樣品后再進(jìn)行一次薄板層析，如果還是不能奏效，就應(yīng)該考慮換一種溶劑體系。
11) 做好TLC標(biāo)記，計算每個斑點的Rf值，并且在筆記本中畫出圖樣。
TLC顯色試劑的選擇
顯色試劑 顯色劑可以分成兩大類：一類是檢查一般有機化合物的通用顯色劑；另一類是根據(jù)化合物分類或特殊官能團(tuán)設(shè)計的專屬性顯色劑。顯色劑種類繁多，列舉一些常用的顯色劑。 l．通用顯色劑
硫酸常用的有四種溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液與0.5-1.5mol／L硫酸銨溶液，噴后110oC烤15min，不同有機化合物顯不同顏色。 0.5％碘的氯仿溶液 對很多化合物顯黃棕色。
中性0.05％高錳酸鉀溶液 易還原性化合物在淡紅背景上顯黃色。
堿性高錳酸鉀試劑 還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色。 溶液I：1％高錳酸鉀溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸鈉溶液；溶液I和溶液Ⅱ等量混合應(yīng)用。 #p#分頁標(biāo)題#e#
酸性高錳酸鉀試劑 噴1.6％高錳酸鉀濃硫酸溶液(溶解時注意防止爆炸)，噴后薄層于180oC加熱15～20min。
酸性重鉻酸鉀試劑 噴5％重鉻酸鉀濃硫酸溶液，必要時150oC烤薄層。 5％磷鉬酸乙醇溶液 噴后120℃烘烤，還原性化合物顯藍(lán)色，再用氨氣薰，則背景變?yōu)闊o色。 ⑧鐵氰化鉀-三氯化鐵試劑 還原性物質(zhì)顯藍(lán)色，再噴2mol／L鹽酸溶液，則藍(lán)色加深。 溶液I：1％鐵氰化鉀溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化鐵溶液；臨用前將溶液I和溶液Ⅱ等量混合。 2．專屬性顯色劑 由于化合物種類繁多，因此專屬性顯色劑也是很多的，現(xiàn)將在各類化合物中**常用的顯色劑列舉如下： (1) 烴類
①硝酸銀／過氧化氫 檢出物：鹵代烴類。 溶液：硝酸銀O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀釋**200ml，再加30％過氧化氫1滴。 方法：噴后置未過濾的紫外光下照射； 結(jié)果：斑點呈暗黑色。
②熒光素／溴 檢出物：不飽和烴。 溶液：I．熒光素0.1g溶于乙醇lOOml；Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。 方法：先噴(I)，然后置含溴蒸氣容器內(nèi)，熒光素轉(zhuǎn)變?yōu)樗匿鍩晒馑?曙紅)，熒光消失，不飽和烴斑點由于溴的加成，阻止生成曙紅而保留熒光，多數(shù)不飽和烴在粉紅色背景上呈黃色。
③四氯鄰苯二甲酸酐 檢出物：芳香烴。 溶液：2％四氯鄰苯二甲酸酐的丙酮與氯代苯(10：1)的溶液。 方法：噴后置紫外光下觀察。
④甲醛／硫酸 檢出物：多環(huán)芳烴。 溶液：37％甲醛溶液O.2ml溶于濃硫酸l0ml。 (2)醇類
3，5一二硝基苯酰氯 檢出物：醇類。 溶液：I．2％本品甲苯溶液；Ⅱ．0.5％氫氧化鈉溶液；Ⅲ．O.002％羅丹明溶液。 方法：先噴(I)，在空氣中干燥過夜，用蒸氣薰2min，將紙或薄層通過試液(Ⅱ)30s，噴水洗，趁濕通過(Ⅲ)15s，空氣干燥，紫外燈下觀察。
硝酸鈰銨 檢出物：醇類。 溶液：I．1％硝酸鈰銨的0.2mol／L硝酸溶液；Ⅱ．N,N-二甲基-對苯二胺鹽酸鹽1.5g溶于甲醇、水與乙酸(128m1+25m1+1．5m1)混合液中，用前將(I)與(Ⅱ)等量混合。噴板后于105oC加熱5min。
③香草醛／硫酸 檢出物：**醇、酚、甾類及精油。 溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。 方法：噴后于120oC加熱**呈色**深。 ④二苯基苦基偕肼 ’ 檢出物：醇類、萜烯、羰基、酯與醚類。 溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。 方法：噴后于110oC加熱5～lOmin。 結(jié)果：紫色背景呈黃色斑點。 (3)醛酮類
品紅／亞硫酸 檢出物：醛基化合物。 溶液：I．0.01%品紅溶液，通入二氧化硫直**無色；Ⅱ．0.05mol／L氯化汞溶液； Ⅲ．O.05mol／L硫酸溶液。 方法：將I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀釋**l00ml。
鄰聯(lián)茴香胺 檢出物：醛類、酮類。 溶液：本品乙酸飽和溶液。
2，4-二硝基苯肼 檢出物：醛基、酮基及酮糖。 溶液：I．0.4％本品的2mol／L鹽酸溶液； Ⅱ．本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加濃鹽酸lml。 方法：噴溶液I或Ⅱ后，立即噴鐵氰化鉀的2mol／L鹽酸溶液。 結(jié)果：飽和酮立即呈藍(lán)色；飽和醛反應(yīng)慢，呈橄欖綠色；不飽和羰基化合物不顯色。
繞丹寧 檢出物：類胡蘿卜素醛類。 溶液：I．1%～5%繞丹寧乙醇溶液；Ⅱ．25%氫氧化銨或27%氫氧化鈉溶液。 方法：先噴溶液I，再噴溶液Ⅱ，干燥。 (4)有機酸類
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