適用于萜烯，桉樹腦(cineoles), withanolides, 出油柑堿(acronycine) 配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水 (1:10:20:80)
（1）磷鉬酸顯色劑：磷鉬酸 5%-10% 乙醇溶液，淡黃色，久置變?yōu)闇\綠色，不影響使用。浸板或噴板，加熱，淺黃色背景，還原性物質(zhì)顯藍(lán)綠色斑點(diǎn)，如果斑點(diǎn)太濃，可能顯深黃色。
（2）CAM顯色劑:鉬酸銨9.6g,硫酸鈰0.4g,10%硫酸水溶液 200ml,混勻，極淡的黃色溶液，棕色瓶密閉保存，噴板，加熱，白色背景，還原性物質(zhì)顯深藍(lán)色斑點(diǎn)。
顯色的方法各種各樣，主要根據(jù)化合物的性質(zhì)選擇不同的顯色方法。許多關(guān)于植物有效成分提取與分離的書上都有介紹，通用的有碘、硫酸乙醇、香草醛－硫酸等，當(dāng)然還有許多專用的顯色劑，如：溴甲酚綠使有機(jī)酸顯黃色，三氯化鐵使酚羥基顯藍(lán)色，碘化鉍鉀使生物堿顯桔黃色..... 顯色劑化合物
二甲氨基苯甲醛 氨基酸，多肽 磷鉬酸苯酚類 若丹明 類酯類
薄層層析常用顯色劑配制及顯色方法
附錄
附錄1 薄層層析及紙層析常用顯色劑配制及顯色方法 通用試劑
(1) 重絡(luò)酸鉀-硫酸:檢查一般有機(jī)物.
噴灑劑:5克重絡(luò)酸鉀溶于100毫升40%硫酸中. 薄層檢查:噴灑后加熱到150℃**班點(diǎn)出現(xiàn) (2) 熒光素-溴:檢查不飽和化合物噴灑劑:0.1克熒光素溶于100毫升乙醇中 溴試劑:5%的溴的四氯化碳溶液
噴灑后處理:噴灑熒光素溶液后,放置存有溴溶液的缸內(nèi),可于紫外線分析燈下檢查熒光,熒光素與溴化和成曙紅(Eosin)(無螢光),而不飽和化合物則成溴加成物,保留了原有熒光;若點(diǎn)樣較多,則呈黃色斑點(diǎn),底板呈紅色. (3) 碘:檢查一般有機(jī)物.
方法:a 層析譜放密閉缸內(nèi)或瓷盤內(nèi)，缸內(nèi)預(yù)先放有碘結(jié)晶少許，大部分有機(jī)化合物呈棕色斑點(diǎn)。
B 層析譜放碘蒸氣中5分鐘（或噴5％碘的氯仿溶液）取出置空氣中待過量的碘蒸氣全部揮發(fā)后，噴1％淀粉的水溶液，斑點(diǎn)轉(zhuǎn)成藍(lán)色。 （4）硫酸：通用
噴灑劑：5％的濃硫酸乙醇溶液，或15％濃硫酸正丁醇溶液，或濃硫酸－醋酸（1：1） 噴灑后處理：空氣中干燥15分鐘，再熱**110℃直**出現(xiàn)顏色或熒光。 （5）硝酸銀－氫氧化銨（Tollen-Zaffaroni）試劑：檢查還原性物質(zhì)。 溶液I : 0.1%N硝酸銀; 溶液II: 5N氫氧化銨 噴灑劑: I和II以1:5混合(臨用前混合)
噴灑后處理: 105℃加熱5~10分鐘,**深黑色斑點(diǎn)出現(xiàn).
(6)磷鉬酸或磷鎢酸,硅鎢酸:檢查還原性物質(zhì),類脂體,生物堿,甾體 噴灑劑: 5~10%磷鉬酸或磷鎢酸或硅鎢酸乙醇溶液 噴灑后處理: 120℃加熱**斑點(diǎn)出現(xiàn).
沉淀試劑: 1克硅鎢酸溶于20毫升水中,加10%鹽酸**強(qiáng)堿性. 生物堿
(7)硫酸??=硫酸:檢查生物堿及含碘化合物
噴灑劑: 0.1克硫酸?混懸于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加熱**沸,逐滴加入濃硫酸**澄清. 噴灑后處理: 110℃加熱數(shù)分鐘**斑點(diǎn)出現(xiàn).
(8)碘化鉍鉀(Dragendorff)試劑:檢查生物堿及其他含氟化合物. 溶液I: 0.85克次硝酸鉍溶于10毫升冰醋酸40毫升水中 溶劑II: 8克碘化鉀溶于20毫升水中. #p#分頁標(biāo)題#e#
制備液I+II,等體積混合.可用于棕色瓶中保存較長時間,一般制備液可作沉淀試劑用. 噴灑液: 制備液1毫升與2毫升醋酸,10毫升水混合即得 (9).碘化汞鉀(Mayer)試劑: 檢查生物堿.
制備液: 13.55克氯化汞和49.8克碘化鉀各溶于20毫升水中,等體積混合并用水稀釋**1000毫升. 噴灑液: 制備液加1/10體積的17%鹽酸.
噴灑后處理: 觀察斑點(diǎn),并于紫外線熒光分析燈下檢出. (10) ?酸納-濃硫酸(Mandelin)試劑:檢查生物堿. 1%>酸納的濃硫酸溶液.與多種生物堿呈不同顏色. (11)碘－碘化鉀(Wagner)試劑:檢查生物堿.
1克碘及10克碘化鉀,溶于50毫升水中,加熱,加2毫升醋酸,再用水稀釋**100毫升. 可作紙層板顯色劑,液可作沉淀試劑.
酚類,鞣質(zhì)
(12)三氯化鐵:檢查酚類及??酸.
噴灑劑:1~5%三氯化鐵的水溶液或乙醇溶液.并加鹽酸少許.??酸呈紅色斑點(diǎn),酚類稱藍(lán)色或綠色斑點(diǎn). (13)鐵氰化鉀-三氯化鉀:檢查酚類,芳香胺類及還原性物質(zhì).
噴灑劑: 1%鐵氰化鉀水溶液,2%三氯化鐵水溶液.臨用前等體積混合.
噴灑后處理: 噴灑后酚性物質(zhì)呈藍(lán)色斑點(diǎn).再噴2N鹽酸,能使顏色加深,紙譜可用烯鹽酸洗去噴灑液. (14) 4-胺基安替比林-鐵氰化鉀(Emerson反應(yīng)): 檢查酚類. 噴灑劑: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液; II. 8%鐵氰化鉀水溶液.
或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%鐵氰化鉀水溶液
方法: 先噴灑I,再噴灑II,即顯色,或再放入密閉缸中,缸內(nèi)放25%氫氧化銨,即產(chǎn)生橙色**深紅色. (15) 對氨基苯磺酸,重氮鹽(Pauly試劑): 檢查酚類,芳香胺類及能偶合的雜環(huán)化合物.
噴灑劑: 4.5克對氨基苯磺酸,加熱溶于45毫升12N鹽酸中,用水稀釋**500毫升,取10毫升稀釋液用冰冷卻,加10毫升冷4.5%亞硝酸鈉水溶液,0℃放15分鐘(此試劑于0℃可保存3天),用前加等體積1%碳酸鈉水溶液.
一般重氮化試劑,也可用聯(lián)苯胺,對硝基苯胺等. (16) 對甲苯磺酸: 檢查甾體,黃酮,鞣質(zhì). 噴灑劑: 20%對甲苯磺酸氯仿溶液.
噴灑后處理: 100℃加熱數(shù)分鐘,紫外線分析燈下檢查熒光斑點(diǎn).含氧雜環(huán)及蒽醌類* (17) 三氯化鋁: 檢查黃酮體.
噴灑1%三氯化鋁乙醇液于紫外線熒光分析燈下檢示,呈黃色熒光 (18)堿式醋酸鉛: 檢查黃酮體.
噴灑劑: 飽和堿式醋酸鉛(或飽和醋酸鉛)水溶液. 于紫外線熒光分析燈下檢查熒光斑點(diǎn). (19)醋酸鎂: 檢查蒽醌甙,甙元及黃酮體 噴灑劑: 0.5%醋酸鎂甲醇溶液
方法: 90℃加熱5分鐘,呈紅色**紫色斑點(diǎn). (20)氫氧化鉀: 檢查香豆素,蒽醌甙及甙元 噴灑劑: 5~10%氫氧化鉀的甲醇溶液. 于日光及紫外線熒光分析燈下檢示斑點(diǎn).
萜類,甾體
(21) 三氯化銻(Carr-Price試劑): 檢查甾體,萜類,皂類.
噴灑劑: 25克三氯化銻溶于75克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的飽和溶液). 噴灑后處理: 100℃加熱5分鐘,于紫外線熒光分析燈下檢示熒光. (22) 五氯化銻: 檢查甾體,萜類,皂甙.
噴灑劑: 五氯化銻-氯仿或四氯化碳(1:4),用前新鮮配制.
噴灑后處理: 120℃加熱**斑點(diǎn)出現(xiàn),并于紫外線熒光分析燈下檢示. (23)香蘭醛-硫酸: 檢查**醇類,酚類,甾體,萜類,芳香油.
噴灑劑: 1克香蘭素溶于100毫升濃硫酸,或0.5克香蘭醛溶于100毫升硫酸-乙醇(4:1)中. 噴灑后處理: 室溫或120℃加熱觀察顯色斑點(diǎn).
(24) 4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.試劑): 檢查? Azulene 及?前體 Proazulene.
噴灑劑: 0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85％磷酸和20毫升水的混合液中(棕色瓶中保存數(shù)月) ?:烴室溫即成藍(lán)紫色斑點(diǎn),>前體于80℃加熱10分鐘出現(xiàn)藍(lán)紫色斑點(diǎn).(25) 氯胺T－三氯醋酸: 檢查強(qiáng)心甙. 噴灑劑: I. 3%氯仿T水溶液新鮮制備. II. 25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存數(shù)天). 10毫升I加40毫升II,用前混合.
噴灑后處理: 110℃加熱7分鐘,紫外線熒光分析燈下檢示呈藍(lán)色或黃色熒光.
(26) 亞硝酸基鐵氰化鈉-氫氧化鈉(Legal試劑): 檢查不飽和內(nèi)酯;甲基酮或活性次甲基,常用于強(qiáng)心甙 噴灑劑: 1克亞硝基鐵氰化鈉溶于100毫升2N氫氧化鈉-乙醇(1:1)的水溶液. 顯紅色或紫色斑點(diǎn).
(27) 3,5-二硝基苯甲酸(Legal試劑): 檢查強(qiáng)心甙,α,β-不飽和內(nèi)酯. 噴灑劑: 1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氫氧化鉀50毫升. 強(qiáng)心甙呈紫紅色斑點(diǎn). 糖類
(28) 鄰苯二甲基苯胺: 檢查還原糖.
噴灑劑: 0.93克苯氨,1.66克鄰苯二甲酸溶于100毫升水飽和的正丁醇中. 噴灑后處理: 105℃加熱10分鐘.
(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：檢查還原糖及其他還原物質(zhì)。 溶液I：4％（T.T.C.）甲醇溶液； 溶液II：1N氫氧化鈉。 噴灑液：I，II，臨用前等體積混合。
噴灑后處理：100℃加熱5～10分鐘，得紅色斑點(diǎn)。 （30）Keller-Kiliani試劑：檢查α－去氧糖，常用于強(qiáng)心甙。 試液：100毫升冰醋酸加三氯化鐵試液0.5毫升混合均勻. #p#分頁標(biāo)題#e#
試樣1毫克加試液2毫克溶解后,沿試官管壁滴入濃硫酸2毫升,接觸面即顯棕色,漸變淺綠,藍(lán)色.**后冰醋酸層全部燃呈藍(lán)色. (31) 1,3-二羥基萘-磷酸: 檢查糖類.
噴灑液: 0.2%1,3-二羥基萘(Naphthoresorcinol)乙醇溶液100毫升,與10毫升85%磷酸混合.(32) 費(fèi)林溶液(Fehling): 檢查還原糖. 溶液I: 69.3克結(jié)晶硫酸銅溶于1000毫升水中. 上述二溶液如不清可濾過.臨用前等體積混合. 氨基酸
(33) 茚三酮: 檢查氨基酸及氨基糖.
噴灑劑: 0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇(或丙酮中). 噴灑后處理: 110℃加熱**斑點(diǎn)出現(xiàn). (34) 吲哚醌: 檢查氨基酸和一些肽.
噴灑劑: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸. 噴灑后處理: 100~110℃加熱10分鐘.
(35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin試劑): 檢查氨基酸.
噴灑劑: 新鮮制備0.02克1,2-萘醌-4-磺酸鈉,溶于100毫升5%碳酸鈉中. 噴灑后處理: 室溫放于,不同氨基酸出現(xiàn)不同顏色. 有機(jī)酸
(36) 酸堿指示劑: 檢查有機(jī)酸.
噴灑劑: 0.05%溴酚藍(lán)(或溴甲酚綠,或溴麝香草酚藍(lán))的乙醇溶液. (37) 氧化還原顯色劑: 檢查有機(jī)酸.
噴灑劑: I. 0.075%溴甲酚綠及0.025%溴酚藍(lán)的無水乙醇液.
II. 0.5%高錳酸鉀及1%碳酸鈉.10H2O的蒸餾水液.臨用前,取I和II按1:1混合后噴酒. 噴酒后處理: 穩(wěn)定時間為5~10分鐘.對不同的有機(jī)酸在紙譜上呈現(xiàn)不同顏色. (38) ??? (Acridine): 檢查酸. 噴灑劑: 0.005%的??乙醇溶劑. 紫外線分析燈下呈黃色熒光. (39) 芳香胺-還原糖: 檢查酸.
噴灑劑: 芳香胺(如苯氨5克)和還原糖(如木質(zhì)糖5克)溶于50%含水乙醇中. 噴灑后處理: 125~130℃加熱出現(xiàn)棕色斑點(diǎn).
